今日，一家美国公司宣布，其通过研发的非病毒、无质粒制造平台实现在人类T细胞实现了抗CD19-CAR（嵌合抗原受体）的表达。而目前的CAR-T细胞疗法是通过病毒递送合成基因来重定向患者T细胞，该公司认为这个利用经由可扩展聚合酶链式反应（PCR）制造过程产生的线性DNA设计的基因来构建在人类T细胞表达抗CD19抗体将是一个新的选择。

　　该公司独特的基于PCR的制造技术创造了编码抗CD19接合器的线性DNA扩增子，然后将该DNA构建体在体外通过电穿孔技术递送至人类T细胞。随后的测试证实，这些工程化T细胞实现了抗CD19 CAR的表达。尽管这些初步数据令人鼓舞，但总体表达水平较低，目前该公司正在继续使用正在申请专利的高表达扩增子技术（HEA）和除电穿孔外的转染方法来产生较高的转染水平，并将在之后报告这一重大成果的进一步进展。

　　该公司总裁表示，“我们的目标有三个方面：1）确定PCR生产的线性DNA作为一个平台用于快速设计和生产治疗性核酸构建体的价值，包括床旁（POC）应用；2）证明NVPF生产流程改善的安全性和治疗价值，该流程不同于目前全行业基于病毒的生产流程；3）与未来的合作伙伴一起，将我们开发的基于NVPF的抗CD19 CAR-T细胞疗法推进临床。

　　这项成果建立在2018年底通过LineaRx公司PCR技术生产、设计、制造的线性DNA扩增子在工程化人类T细胞的第一个实例基础上。该实例首次证明了一种包含可编码绿色荧光蛋白（GFP）完整基因的线性DNA扩增子。如上图所示，通过高通量电穿孔技术，PCR产生的GFP基因片段在数百个人类T细胞中被摄入及随后表达，形成了绿色荧光细胞群。

　　在不使用病毒载体或质粒的情况下，该公司的NVPF制造平台比现有的基于病毒/质粒的CAR-T方法具有许多潜在的优势包括：1）简化的制造流程将降低成本和交付周期；2）降低永久性遗传整合/重组进入靶细胞的风险，降低插入诱变的风险；3）细胞因子风暴治疗副作用的潜在缓解；4）靶向新抗原的最终能力足以快速影响患者；5）避免复杂和繁琐的分布式供应链，加速治疗。

　　专家认为，该公司的NVPF方法降低了药品生产的效率、成本，同时提高了药品的安全性，对很多药企来说是一个重要的选择。