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组织细胞的破碎方法
时间:2014-03-07 09:30:53  作者:网站编辑  来源:细胞
组织细胞的破碎方法很多,有机械方法、物理方法、化学方法和生物化学方法等.在破碎前,材料常需要预处理

    组织细胞的破碎方法很多,有机械方法、物理方法、化学方法和生物化学方法等.在破碎前,材料常需要预处理,如动物材料要除去与实验无关甚至有妨碍的结缔组织,脂肪组织和血污等,植物种子需要除壳,微生物材料需将菌体和发酵液成分分开等.
    不同实验规模、不同实验材料和实验要求,使用的破碎方法和条件也不同.一些坚韧组织,如肌肉、植物的根茎等,常需要强烈的搅拌或研磨作用,才能把其组织细胞破坏.而比较柔软的组织如肝、脑等,用普通的玻璃匀浆器即可达到完全破坏细胞的目的.对同一实验材料,由于实验目的(要求)的不同,采用的破碎方式也存在一定差异,如提取中的核酸和提取其中的核苷酸,前者必须保持十分温和的条件,以保持分子的完整性;后者可采用强烈手段. 
    1、机械法 
    主要通过机械切力的作用使组织细胞破碎的方法,常用的器械有组织捣碎机、匀浆器、研钵和研磨、压榨器等.
1)组织捣碎机
    一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等,转速可高达10000rpm/M以上.由于旋转刀片的机械切力很大,制备一些较大分子如核酸则很少使用.
    2)匀浆器
    匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离,破碎细胞的程度比组织捣碎机高.制作匀浆器的材料,除玻璃外,还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等.
    3)研钵
    多用于细菌或其他坚硬植物材料,研磨时常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨剂,以提高研磨效果.
    4)细菌磨 
    是一种改良了的研磨器,比研钵具有更大的研磨面积,而且低部有出口.操作时先把细菌和研磨粉调成糊状,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎.
    2、物理法 
    主要通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法.在生化制备中常用的方法有:
    1)反复冻溶法 
    先将样品深冷至-15---20度使之冻固,再缓慢的融化,反复多次,多用于动物性材料.
    2)急热骤冷法 
    将材料投入沸水中,维持85-90分钟,至水浴中急速冷却,此法可用于细菌及病毒材料.
    3)超声波处理 
    频率一般选在10KC至200KC,功率200-500瓦范围,处理时间有数分钟至数十分钟不等,处理过程中注意冷却.此法多用于微生物材料. 
    3、化学及生物化学法
    有自溶法,酶解法和表面活性剂法等.
    1)自溶法 
    在一定PH和适当的温度下,利用组织细胞内自身的酶系统将细胞破碎的方法.此过程需较长时间,常用少量防腐剂如甲苯、氯仿等防止细胞的污染.
    2)酶溶法 
    利用各种水解酶,如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶、半纤维素酶、脂酶等,将细胞壁分解,使细胞内含物释放出来.有些细菌对溶菌酶不敏感,加入少量巯基试剂或8摩尔尿素处理后,使之转为对溶菌酶敏感而溶解.
    3)表面活性剂处理 
    如十二烷基硫酸钠、氯化十二烷基吡啶等.

关键字:组织细胞
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