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内皮祖细胞采集、分离纯化与保存
时间:2019-11-12 10:40:47  作者:微微  来源:《微创美容外科学》
采用基础培养液EBM-2(DMEM、EGM-2)、M199进行培养。

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  1、采集
  采用基础培养液EBM-2(DMEM、EGM-2)、M199进行培养,少数情况下应用RPM111640、IMDM长周期培养液和条件培养液,胎牛血清浓度一般为5%~20%,同时添加不同种类的细胞生长因子,如血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞因子、牛脑提取物和表皮生长因子(EGF)等。最近国外报道,将分离的EPC用添加特殊生长因子的EBM-2培养液在特殊辅层(如纤维连接蛋白)上进行培养效果较佳。培养皿包被人纤维连接蛋白或胶原可使EPC更好地生长,人纤维连接蛋白的作用强于胶原,并有促进EPC分化的作用。大量研究报道显示,浓度为25~50mg/L的纤维连接蛋白可使细胞良好贴壁和产生细胞分化的形态特征。相关实验显示,(3~5)*106/cm2的接种密度使每106个单个核细胞得到的贴细胞数和细胞集落数最多。
  2、分离纯化
  有差速贴壁法、免疫磁珠法、流式细胞仪分类筛选法、生物素-抗生素亲和吸附法、单抗铺展贴壁法等。
  每种方法各有优缺点:
  ①免疫磁珠法:得到的细胞纯度高,但细胞数少,分化差,费用昂贵;
  ②贴壁选择法:操作简单、方便,但得到的细胞纯度低。
  目前多用单个核细胞贴壁法培养获得EPCs。
  3、保存
  收集生长良好的细胞,取少量细胞悬浮液计数细胞浓度及冻前存活率。将细胞加入到含10%DMSO和30%血清的新鲜培养基中用无菌塑料冷冻保存管放入到程序降温盒中,保持-70℃,24h后转入液氨保存。
关键字:内皮祖细胞
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